聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction),簡稱PCR,是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA-片段。可看作生物體外的特殊DNA復制。
PCR是實驗室常用的實驗方法,那么在PCR方法操作中,需要注意哪些事項呢?今天小編帶您了解一下。
配 膠
1.電子稱的使用,要時刻注意保持電子稱的精確性,保持清潔,根據不同的濃度的膠稱瓊脂糖。
2.加 TAE(化學試劑)的量要適當,以免配出來的膠太薄導致膠孔太淺或濃度太低。
3.倒膠前膠托一定要洗干凈,并擦干;倒膠時要待膠冷到一定溫度搖勻盡量不要產生氣泡。若膠液的溫度太高要頂在膠托防止膠托變形。
點樣電泳
1.loading要點均勻,控制在 1~2ul的量,并做好對應標記。
2.加樣時,槍頭要上緊,吸樣均一準確,排液時吸頭不要有殘留。
3.點樣前-好檢查待用膠是否合格;點樣時要對準膠孔,盡量點完所有的樣。
4.點完樣勿忘點 marker并擺正膠位,電泳儀正負極不要插反,電泳槽的蓋子要蓋緊。
染 色
1.碰到 EB(化學試劑)的手套要及時丟棄。
2.EB液要適時跟換,盤子要清洗。
3.抹布要嚴格區分,不可交叉使用
凝膠圖像分析儀的使用
1.使用前要注意清潔,以免影響膠圖的清晰度。
2.照膠時盡量減少開紫外燈的時間。
3.拍照時先關攝像頭再關紫外燈,不可顛倒,嚴格按照照膠的流程進行。
4.照好的膠及時丟棄。